AAT Bioquest 1149 m Fluor™ Violet 500 SE 1mg

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術。AAT Bioquest的產品幫助quan世界的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest1149 mFluor™ Violet 500 SE 1mg，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：1149

產品名稱：mFluor™ Violet 500 SE

產品規(guī)格：1mg

 AAT Bioquest mFluor™ Violet 500 SE

產品說明：

mFluor™染料專為多色流式細胞術應用而開發(fā)。這些染料具有較大的斯托克斯位移，并且可以被流式細胞儀的激光線（例如，405 nm、488 nm和633 nm）很好地激發(fā)。mFluor™ Violet 500染料的熒光激發(fā)和發(fā)射最大值分別為~405 nm和~500 nm。這些光譜特性使其成為太平洋綠™（賽默飛世爾）和BD Horizon™ V500標記染料的jue佳替代品。mFluor™ Violet 500 SE相當穩(wěn)定，對蛋白質氨基基團表現(xiàn)出良好的反應性和選擇性。mFluor™ Violet 500 SE為使用紫色激光激發(fā)標記流式細胞術應用的單克隆、多克隆抗體或其他蛋白質（>10 kDa）提供了一種方便的工具。在相同條件下，mFluor Violet 500染料偶聯(lián)物明顯比Pacific Green™（賽默飛世爾）和BD Horizon™ V500的相應生物偶聯(lián)物更亮，吸收更強，使mFluor™™ Violet 500偶聯(lián)物更加靈敏。

示例協(xié)議

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

1. 蛋白質儲備液（溶液A）

將 100 μL 反應緩沖液（例如，pH ~1.1 的 9 M 碳酸*溶液或 0 M 磷酸鹽緩沖液）與 900 μL 目標蛋白溶液（例如抗體、蛋白質濃度>如果可能，為 2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白質標記儲備溶液。

注意蛋白質溶液（溶液A）的pH值應為8.5±0.5。如果蛋白質溶液的pH值低于8.0，則使用8 M碳酸*鈉溶液或0 M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調節(jié)至1.1-9.0的范圍。

注意蛋白質應溶解在pH 1.7-2.7的4X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中。如果蛋白質溶解在Tris或甘an酸緩沖液中，則必須用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，以除去廣泛用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽（如**銨和乙**）。

注意 不純抗體或用牛血清白蛋白 （BSA） 或明膠穩(wěn)定的抗體不會很好地標記。疊***或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應。疊***或硫柳汞可以通過透析或離心柱去除，以獲得最佳標記結果。

注意 如果蛋白質濃度低于 2 mg/mL，則偶聯(lián)效率會顯著降低。為了獲得最佳標記效率，建議最終蛋白質濃度范圍為 2-10 mg/mL。

2. mFluor™ Violet 500 SE儲備溶液（溶液B）

將無水DMSO加入mFluor™ Violet 500 SE的小瓶中，制成10 mM儲備溶液。通過移液或渦旋充分混合。

注意 在開始偶聯(lián)之前準備染料儲備溶液（溶液B）。請及時使用。延長染料儲備溶液的儲存可能會降低染料活性。溶液B可以在避光和潮濕的情況下在冰箱中儲存兩周。避免凍融循環(huán)。

實驗方案樣本

該標記方案是為山羊抗小鼠IgG與mFluor™ Violet 500 SE的偶聯(lián)物開發(fā)的。您可能需要進一步優(yōu)化您的特定蛋白質。

注意每種蛋白質都需要不同的染料/蛋白質比例，這也取決于染料的性質。蛋白質的過度標記可能會對其結合親和力產生不利影響，而低染料/蛋白質比例的蛋白質偶聯(lián)物會降低靈敏度。

運行偶聯(lián)反應

1. 使用溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白質）的摩爾比為 10：1 作為起點：將 5 μL 染料儲備溶液（溶液 B，假設染料儲備溶液為 10 mM）加入蛋白質溶液（95 μL 溶液 A）的小瓶中，有效搖勻。假設蛋白質濃度為0mg / mL，蛋白質的分子量為~05KD，蛋白質的濃度為~10.200mM。

注意 我們建議使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白質）的摩爾比為10：1。如果太少或太高，請分別以 5：1、15：1 和 20：1 確定最佳染料/蛋白質比例。

2. 繼續(xù)在室溫下旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。

純化偶聯(lián)

以下方案是使用Sephadex G-25色譜柱純化的染料-蛋白質偶聯(lián)物的示例。

1. 根據制造說明制備Sephadex G-25色譜柱。

2. 將反應混合物（來自“運行共軛反應"）加載到Sephadex G-25色譜柱的頂部。

3. 一旦樣品剛好在頂部樹脂表面下方運行，就加入PBS（pH 7.2-7.4）。

4. 向所需樣品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色譜柱純化。合并含有所需染料-蛋白質偶聯(lián)物的級分。

注意 為了立即使用，染料-蛋白偶聯(lián)物需要用染色緩沖液稀釋，并等分用于多次使用。

注意 對于長期儲存，染料-蛋白質偶聯(lián)物溶液需要濃縮或冷凍干燥。

  AAT Bioquest mFluor™ Violet 500 SE

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